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MycoStrip™—細胞支原體污染檢測技巧

更新時間:2023-05-06   點擊次數(shù):413次

支原體污染是細胞培養(yǎng)中一個主要的污染問題,能夠嚴重影響實驗結(jié)果的重現(xiàn)性和有效性。InvivoGen公司憑借40多年為科學界開發(fā)支原體解決方案的經(jīng)驗,開發(fā)了簡單可靠的檢測細胞培養(yǎng)支原體污染的MycoStrip™試劑盒,基于等溫PCR的技術(shù)檢測支原體污染,在5分鐘內(nèi)就能于免疫層析試紙條上快速顯示結(jié)果。如需購買該產(chǎn)品,請聯(lián)系Invivogen代理商欣博盛生物。

MycoStrip™—細胞支原體污染檢測原來可以這么簡單 

支原體屬于柔膜菌綱,其成員特征為缺乏細胞壁以及擁有多變的形態(tài)。支原體對包括原代細胞在內(nèi)的所有真核細胞類型具有高度傳染性。成百上千的支原體可以附著在一個細胞上,與細胞膜融合、繁殖,最終數(shù)量可以超過培養(yǎng)細胞1000倍。支原體沒有細胞壁的特點使它們對常用的抗生素(如青霉素和鏈霉素)產(chǎn)生抗性。 此外,它們的尺寸微?。▇100 nm),能夠穿透過 0.2 μm 的標準過濾膜。支原體與宿主細胞競爭營養(yǎng)素和代謝物前體,它們能改變許多細胞功能,影響到細胞代謝和細胞生長,最終導致細胞死亡。因此,我們需要采取預防措施來防止細胞培養(yǎng)物受到污染。


目前的支原體檢測方法大多費時費力。Japanese cell bank驗證了由InvivoGen開發(fā)的基于等溫PCR的支原體快速檢測試劑盒MycoStrip的有效性,并將其檢測靈敏度與其他檢測方法進行了比較。實驗中,將M. hyorhinis支原體(NBRC 14858)加入到VERO細胞(JCRB0111)中進行培養(yǎng),稀釋后的樣品分別用MycoStrip、生物發(fā)光法(Bioluminescence assay)、熒光染色法(Fluorescent staining)和Nested-PCR進行檢測。經(jīng)證實,MycoStrip的靈敏度與熒光染色的靈敏度相當,顯示出足夠的檢測效率證明了基于等溫PCR的MycoStrip是一種簡單且高度通用的支原體檢測方法,因為該檢測方法不需要特殊設備,將試劑與樣品混合并滴在試紙上即可輕松快速地獲得結(jié)果。MycoStrip可普遍用于支原體污染的常規(guī)檢測。

 

MycoStrip™ 優(yōu)勢

• 簡單:只需要一個加熱塊

• 快速:2—5分鐘內(nèi)顯示結(jié)果

• 輕松解讀:試紙條上出現(xiàn)一或兩條條帶

• 最少的操作時間:<15分鐘

• 總檢測時長:<1小時

• 靈敏度高:檢測限低至1 x 102 CFU/ml

• 特異性高:無交叉反應

• 穩(wěn)定:試劑盒可在-20°C下保存1年

 

使用MycoStrip™檢測支原體

MycoStrip™專門設計用于檢測最常污染細胞培養(yǎng)的支原體和無膽甾原體,其中包括導致95%細胞培養(yǎng)污染的六個物種。重要的是,使用MycoStrip™不會與任何其他細菌、真菌或哺乳動物DNA發(fā)生交叉反應。

 MycoStrip™—細胞支原體污染檢測原來可以這么簡單

 

4 個簡單步驟檢測細胞培養(yǎng)物中的支原體

 

MycoStrip™—細胞支原體污染檢測原來可以這么簡單 

 

50 和100 strips的規(guī)格還可以提供不帶卡殼的形式,更經(jīng)濟、環(huán)保。

MycoStrip™—細胞支原體污染檢測原來可以這么簡單 

 

產(chǎn)品組份


With cassette

Without cassette

產(chǎn)品名稱

MycoStrip™

MycoStrip™ 50

MycoStrip™ 100

產(chǎn)品貨號

rep-mys-10

rep-mys-20

rep-mys-50

rep-mysnc-50

rep-mysnc-100

組分

10 Tests

20 Tests

50 Tests

50 Tests

100 Tests

• Reaction Mix

1 vial

2 vials

5 vials

5 vials

10 vials

• Reaction Buffer

1 vial

2 vials

4 vials

4 vials

8 vials

• Migration Buffer

2 vials

3 vials

1 bottle

1 bottle

2 bottles

• Positive Control

1 vial

1 vial

1 vial

1 vial

2 vials

• Detection strips

10

20

50

50

100

 

結(jié)果示例

MycoStrip™—細胞支原體污染檢測原來可以這么簡單 

 

常見問題

1. 如果支原體檢測呈陽性怎么辦?

InvivoGen有解決方案!可以使用InvivoGen全面的抗支原體試劑清除和預防污染。推薦用Plasmocin™ 或Plasmocure™ ,治療完成后(約2周),使用MycoStrip™重新檢測。 

2. 收集的待測上清液中含有一些細胞,會干擾檢測嗎?

無需擔心,哺乳動物細胞DNA的存在不會影響檢測分析。 

3. 樣品制備過程中,將樣品加熱到95°C是否有好處?

敏感度沒有提高,但此步驟可以殺死支原體,避免接觸活的支原體。

4. 是否每次使用MycoStrip™時都需要設立陽性和陰性對照?

包括陽性和陰性對照的定期監(jiān)測,對于結(jié)果的可靠性以及故障排除很重要。

5.在什么階段可以凍存樣品以供后續(xù)檢測分析?

可以按照以下方式儲存樣本:

• 細胞培養(yǎng)上清液:在開始“樣品制備"方案之前,可以將上清液儲存在-20°C直到需要使用時。使用前,將樣品在37°C下完-全解凍,渦旋充分混勻以確保所有鹽溶解。

• 已制備的樣品:執(zhí)行“樣品制備"方案的步驟1-4之后,可以將樣品存儲在-20°C直至需要使用時。 

• 處理過的樣品:執(zhí)行“檢測分析"方案的步驟1-4之后,處理過的樣品在-20°C下最多保存3個月。

6. 有一個樣本的測試帶模糊,不能確定是否應將其視為支原體污染的陽性結(jié)果?

如果其中一個樣品上觀察到一條微弱的條帶,可以認為這是支原體污染的陽性結(jié)果。建議使用以下方法確認此結(jié)果: 

• 濃縮樣品:使用更大體積的上清液并重復“樣品制備"方案中步驟2-3。使用MycoStrip™重新檢測濃縮后的樣品。

• 在使用MycoStrip™重新檢測之前,繼續(xù)培養(yǎng)細胞48小時。

• 使用無菌水(不含核酸酶)替代PBS重懸樣品,以提高檢測的靈敏度。

7. 實驗室中沒有熱循環(huán)儀,可以使用什么代替?

可以使用校準過的加熱塊或水浴代替。請注意,使用水浴可能會引入新的污染源。 

8. 如果將準備好的樣品在加熱塊上放置了一個多小時,是否仍然能使用該樣品?

在65°C下孵育40分鐘以上會顯著影響檢測結(jié)果,因此不建議繼續(xù)使用此樣品。

 

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產(chǎn)品貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

產(chǎn)品說明

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細胞比色分析法檢測支原體污染

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500 samples

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Plasmocin® prophylactic

25 mg (10 x 1 ml)

支原體預防試劑

ant-mpt

Plasmocin® treatment

50 mg (2 x 1 ml)

支原體清除試劑

ant-mpt-1

Plasmocin® treatment

25 mg (1 x 1ml)

支原體清除試劑

ant-pc

Plasmocure™

100 mg (1 ml)

強效支原體清除抗生素,適合用于帶有Plasmocin抗藥性支原體



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